一、原理與構成

 

　　厭氧培養裝置的主要作用是為厭氧菌提供一個缺氧的培養環境。一般來說，裝置的設計包括兩個核心要素：

 

　　1.氣體環境控制系統：為了去除空氣中的氧氣，常使用氮氣、氫氣等惰性氣體或含有二氧化碳的氣體，創建一個缺氧或無氧的環境。在一些設備中，氫氣與二氧化碳混合后可以通過催化劑作用生成水，進一步去除氧氣。

 

　　2.密封系統：必須具備良好的密封性，以避免外界氧氣的滲透。在厭氧菌的培養過程中，外界氧氣的存在會抑制厭氧菌的生長，甚至導致其死亡。

 

　　常見的裝置包括厭氧罐、厭氧瓶、厭氧培養箱等。根據實驗需要，可以選擇不同類型的設備。

 

　　二、厭氧菌培養的基本步驟

 

　　1.培養基的選擇與準備

 

　　厭氧菌的培養基需要適應其缺氧的生長要求。常用的厭氧培養基包括肉湯培養基、瓊脂培養基等，這些培養基通常加入適量的還原劑，如硫代硫酸鈉，以去除其中的溶解氧。在使用時，培養基需要高壓滅菌，以確保其中不含有其他微生物。

 

　　2.樣本的采集與預處理

 

　　樣本采集時，需要確保樣本不暴露于空氣中。可以使用厭氧轉移器或專門的無菌設備，將樣本轉移到培養容器中。對于采集到的糞便、組織或土壤樣本，可以通過培養基的稀釋接種法進行初步分離。

 

　　3.厭氧氣氛的建立

 

　　將培養容器（如厭氧瓶或厭氧罐）密封，并使用厭氧培養設備提供無氧氣體環境。常用的氣體配比為氮氣、氫氣與二氧化碳，比例大致為80：10：10。通過氣體的循環流動，迅速去除容器中的氧氣并穩定其內部環境。

 

　　4.培養與觀察

 

　　將裝有培養基和樣本的培養容器置于培養箱中，維持合適的溫度，通常為37℃。培養時間可以根據厭氧菌的特性進行調整，一般為24-48小時。在此過程中，可以定期觀察菌落的生長情況。生長良好的厭氧菌會在培養基上形成菌落。

 

　　5.厭氧氣氛的驗證

 

　　在厭氧培養過程中，需要定期驗證培養環境的厭氧性。可以通過使用厭氧指示劑（如脫氧指示劑）來確認是否存在氧氣污染。此外，還可以使用厭氧氣氛監測儀器，實時監控容器內氣氛的變化。

 

　　三、如何正確使用厭氧培養裝置

 

　　1.確保密封性

 

　　在使用時，首先需要檢查培養容器的密封性，確保沒有氣體泄漏。密封性不好會導致氧氣進入，影響厭氧菌的生長。特別是在更換氣體時，要確保操作迅速，避免外部空氣進入。

 

　　2.適當的氣體配比

 

　　使用的氣體應根據不同的厭氧菌種類和實驗需求進行選擇。氮氣可以作為主要的惰性氣體，幫助去除氧氣，氫氣和二氧化碳可以用于創造特定的厭氧環境。氣體的濃度和流速也要根據培養瓶的體積和培養需求來調節。

 

　　3.定期檢查培養狀態

 

　　雖然厭氧培養通常比較穩定，但仍需要定期檢查培養容器的狀態。特別是使用厭氧指示劑時，可以觀察顏色的變化，判斷是否需要更換氣體或調整培養環境。

 

　　4.避免培養過程中污染

 

　　在厭氧菌培養過程中，保持嚴格的無菌操作非常重要。任何外界污染都可能導致實驗失敗，因此要確保使用無菌的培養器具、培養基，并盡量減少操作過程中的空氣暴露。